Eletrossíntese e caracterização de filmes poliméricos aplicados ao desenvolvimento de um imunossensor para diagnóstico de Dengue

Abstract

A infecção pelo vírus da Dengue constitui-se em uma das doenças mais negligenciadas e de maior importância para a saúde pública no mundo. É uma doença de amplo espectro clínico, incluindo desde formas brandas até quadros graves, causada por diferentes sorotipos do vírus. Não existe tratamento específico para a Dengue. No entanto, a detecção precoce e o acesso a cuidados médicos adequados reduzem as taxas de mortalidade para abaixo de 1%. Novos métodos de diagnóstico da doença têm sido estudados através da imobilização da proteína não-estrutural 1 (NS1) do vírus dengue, por esta ser um marcador utilizado durante a fase aguda da doença. Para isso, imunossensores utilizando a detecção eletroquímica têm sido explorados em várias análises, uma vez que são específicos, simples, portáteis e geralmente descartáveis e podem realizar a detecção in situ ou automatizada. Neste trabalho, realizou-se a síntese eletroquímica de filmes poliméricos derivados do ácido 4-aminobenzóico (4-ABA), 4-aminobenzamida (4-ABZ), ácido 4-hidroxibenzóico (4-HBA) e 4-hidroxibenzamida (4-HBZ) na superfície de eletrodos de grafite através da voltametria cíclica (VC). Posteriormente, foi proposto um mecanismo de eletropolimerização para os polímeros obtidos. As propriedades eletroquímicas, morfológicas e estruturais dos filmes poliméricos formados e suas aplicações na imobilização de biomoléculas foram investigadas. Desta forma, verificou-se que os eletrodos modificados com poli(4-ABA) e poli(4-HBA) foram mais eficazes na imobilização da proteína recombinante não estrutural 1 (rNS1) e de anticorpos anti-NS1. Na segunda parte deste trabalho, um novo imunossensor eletroquímico baseado em anticorpos específicos anti-NS1 acoplados a eletrodos impressos de grafite modificados com poli(4-ABA) foi desenvolvido com sucesso para o diagnóstico do vírus da Dengue. A análise de validação foi realizada com amostras de soro humano, onde após os testes sorológicos (ELISA), diferentes soros foram testados pelo teste rápido da Bioclin, e os diagnósticos foram confirmados pelo método impedimétrico utilizado neste trabalho. Os resultados obtidos foram todos positivos para a metodologia imunocromatográfica utilizada no teste rápido e para a detecção impedimétrica de anticorpos anti-NS1. A comparação entre os resultados mostra que o dispositivo fabricado pode ser aplicado satisfatoriamente para o diagnóstico preciso do vírus da Dengue, apresentando excelentes resultados, sendo assim, uma nova alternativa de detecção da Dengue.