Análise do perfil de citocinas e quimiocinas e mecanismos de ativação e migração leucocitária em lesões renais de ratos com sindrome nefrótica induzida pela doxorrubicina

Abstract

A síndrome nefrótica (SN) é definida por proteinúria maciça, edema, hipoalb uminemia e hiperlipidemia e desenvolve a partir da lesão dos glomérulos, especialmente d os podócitos. Pode ser um a alteração primária (idiopática), com o uma doença específica para os rins, ou secundária a alguma doença sistêmica prévia. Histologicamente, a síndrome nefrótica idiopática ( SNI ) é definida pela combinação das manifestações clínicas associadas às anormalidades histológicas inespecíficas do rim, incluindo glomerulo esclerose focal e segmentar (GESF). A SN pode ser estudada, em modelo animal, por m eio de injeções locais de Cloridrato de doxorrubicina ( Adriamicina® ) na dose de 7,5mg/kg em que, injeção intravenosa única pode induz ir proteinúria grave, semelhante à observada em humanos. Embora os mecanismos patogênicos da SNI persistam obscuros, altera ções das respostas imunológicas , como as respostas atípicas dos linfócitos T e a atuação de citocinas e quimiocinas, parecem estar envolvidas no dano aos glomérulos. Neste sentido, a finalidade do presente estudo foi avaliar a participação de citocinas e q uimiocinas, por meio da expressão de IL - 1, IL - 4, CXCL1, CCL3/MIP - 1 e CCL5/RANTES em amostras de tecido renal e de urina, nos mecanismos de ativação e migração leucocitária, bem como as alterações bioquímicas, histológicas e biométricas em ratos com SN indu zida pela doxorrubicina. O protocolo experimental foi devidamente registrado e aprovado pela comissão de ética no uso de animais, da Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (CEUA - UFVJM) sob o protocolo Nº 029/2014. Foram utilizados 25 rato s machos ( Wistar ) , peso médio de 350 gramas e idade média de seis semanas . Os animais foram divididos em dois grupos: CON (n=5), que recebeu injeção endovenosa de solução salina como grupo controle e DOXO (n=25), que recebeu injeção endovenosa de doxorrubi cina. Os animais do grupo DOXO foram eutanasiados e avaliados nos tempos 7, 14, 21 e 28 dias após a injeção. Foram coletadas amostras urinárias (24 hs) e amostras sanguíneas ( punção cardíaca). Após a coleta sanguínea, os órgãos foram perfundidos com soluçã o salina, sendo coletados os rins direito e esquerdo, que foram pesados e devidamente acondicionados , para posteriores análises biométricas, histológicas e imunológicas. A contagem total de leucócitos foi realizada em câmara de Neubauer. A avaliação das am ostras urinárias e teciduais para a detecção de citocinas e quimiocinas foi realizada por ELISA. A nimais do grupo DOXO desenvolveram proteinúria a partir do 7 º dia após a injeção de doxorrubicina , a qual permaneceu durante todo o período experimental. O bse rvou - se, ainda, hipercreatininemia, alterações biométricas , histológicas e dos leucogramas neste mesmo grupo . De modo geral, os animais expressaram maior concentração de citocinas e quimiocinas no tecido renal do que na s amostras de urina, sugestivo de um processo de secreção relacionad o à produção tecidual local. Além disso, o s resultados obtidos n o presente estudo proporciona ra m uma contribuição inédita em relação à participação da quimiocina CXCL1 na fisiopatogenia da SN. Sua expressão n a urina pode rá es tar r elacionada com a instalação das reações oxidativas nas fases iniciais da doença, conforme já demonstrado por nosso grupo, nest e modelo experimental . Podendo, ainda, sugerir a participação de leucócitos polimorfonucleares (neutrófilos) na etiopatogenia da SN , em sua fase inicial . Contudo, outros estudos serão necessários a fim de correlacionar a expressão tecidual d a citocina CXCL1 à presença de neutrófilos no tecido renal e, consequente, produção de radicais livres neste modelo experimental de nefropat ia induzida pela doxorrubicina.