Triagem fitoquímica e atividade antiproliferativa do extrato diclorometano-etanólico de raízes de Eriosema crinitum (Kunth) G. Don (Leguminosae)

Abstract

A Eriosema crinitum (Kunth) G. Don é utilizada no Vale do Jequitinhonha como planta anti-inflamatória na forma de decocção de suas raízes. Tendo em vista a complexidade do processo inflamatório, o qual envolve a ativação de células do sistema imune e produção de diversos mediadores, o objetivo desse estudo foi realizar uma triagem fitoquímica e avaliar a possível atividade anti-inflamatória, in vitro, do extrato diclorometano-etanólico de raízes de E. crinitum, através da avaliação do efeito do mesmo sobre a proliferação de linfócitos, a produção de citocinas e da ciclooxigenase 2 (COX-2). A triagem fitoquímica do extrato foi realizada por meio de reações cromogênicas, fluorogênicas e de precipitação, seguidas da análise em cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD). A citotoxicidade do extrato sobre hemácias, após 4 horas de cultura, e sobre leucócitos do sangue periférico humano, após 24 horas ou 5 dias de cultura, foi avaliada por meio do teste de atividade hemolítica e pelo método de exclusão com azul de Tripan, respectivamente. Na avaliação do efeito do extrato sobre a proliferação de linfócitos, por citometria de fluxo, células mononucleares do sangue periférico humano (PBMC) foram incubadas, por 5 dias, em meio de cultura contendo o mitógeno Fitohemaglutinina (PHA), na presença ou ausência do extrato nas concentrações de 25 μg/mL, 12,5 μg/mL e 6,25 μg/mL. Essas mesmas culturas foram realizadas no tempo de 36 horas para análise da citocina IL-2, por ELISA. Para análise da produção das citocinas TNF-α e IFN-γ, culturas de sangue total foram estimuladas com Miristato Acetato de Forbol (PMA) e tratadas com o extrato nas concentrações de 50 μg/mL, 25 μg/mL e 12,5 μg/mL. Essas concentrações foram utilizadas em culturas de sangue total estimuladas com lipopolissacarídeo (LPS) para investigação do efeito do extrato sobre a expressão de COX-2. A produção de citocinas e de COX-2 foi analisada por citometria de fluxo. Os resultados evidenciaram a presença de terpenos e das subclasses dos flavonoides: flavonas e flavonóis no extrato. O extrato, nas concentrações iguais ou inferiores a 50 μg/mL, não foi tóxico para culturas celulares de 24 horas e, para culturas de 5 dias, as concentrações não tóxicas foram iguais ou inferiores a 25 μg/mL. Quanto à ação anti-inflamatória, o extrato não inibiu a produção das citocinas TNF-α e IFN-γ e também não foi capaz de reduzir a expressão de COX-2. No entanto, o extrato inibiu a proliferação de linfócitos e suas subpopulações T CD4 e TCD8, tendo uma eficácia em relação à Dexametasona de 71,65%, 53,14% e 167,94% para linfócitos totais, T CD4 e T CD8, respectivamente. O extrato também reduziu os níveis de IL-2 nas culturas estimuladas com PHA. Esses achados sugerem que o extrato apresenta um efeito inibidor, principalmente sobre a proliferação de células T CD8, associado à inibição na produção de IL-2. Diante dos resultados apresentados, os princípios ativos presentes na planta parecem exercer suas funções anti-inflamatórias regulando a proliferação de linfócitos T, principalmente os linfócitos T CD8. Essa função poderia ser explorada em desordens de natureza inflamatória-linfoproliferativa, bem como prevenção da rejeição de transplantes de órgãos. Para tal, ensaios adicionais são necessários para investigar e identificar os constituintes ativos e os mecanismos moleculares envolvidos na ação inibitória apresentada pelo extrato.