Desenvolvimento de um imunosensor pela técnica de ressonância de plásmons de superfície para detecção em tempo real de anticorpos anti - leishmania infantum

Abstract

Neste trabalho, foi realizado o desenvolvimento de um imunosensor para detecção de anticorpos anti-Leishmania infantum. O princípio de transdução foi a Ressonância de Plásmons de Superfície (SPR) e o sensor foi produzido através da imobilização covalente de antígenos solúveis de Leishmania infantum sobre Monocamada Auto-Organizada (SAM) do ácido 11-Mercaptoundecanóico (11-MUA) ativado pela mistura contendo 100,0 mmol.L-1 de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) e 150 mmol.L-1 de N-hidroxisuccinimida (NHS). Através das técnicas de Voltametria Cíclica e Redução Dessortiva por Voltametria de Pulso Diferencial o processo de formação da SAM foi otimizado. Sob condições otimizadas, 1,0 mmol.L-1 da solução etanólica de 11-MUA e 24 horas foram suficientes para a formação de uma SAM estável sobre a superfície de ouro. Para obtenção de informações complementares da SAM, foram realizados cálculos da Cobertura de Superfície, Constante Dielétrica e Espessura do tiol adsorvido no substrato de ouro. Após esta etapa, a adição de antígenos solúveis de L. infantum sobre a SAM foi acompanhada por SPR. As técnicas de Voltametria Cíclica e Espectroscopia de Impedância Eletroquímica foram usadas para caracterizar a imobilização do antígeno. Após construção do imunosensor, foram adicionados em sua superfície soros caninos positivos para Leishmaniose Visceral, evidenciando variação significativa no ângulo de SPR, mostrando excelente sensibilidade da técnica para detecção da interação antígeno-anticorpo. Por outro lado, a adição dos soros negativos não foi acompanhada com resposta significativa, concluindo-se também que o imunosensor apresentou boa especificidade contra anticorpos anti-L. infatum. Portanto, neste trabalho foi desenvolvido com sucesso um sensor empregando SPR para detecção em tempo real de anticorpos anti-L. infatum, apresentando grande perspectiva como sistema de sensoriamento da Leishmaniose Visceral em áreas endêmicas.