Manual técnico e de operação do Western Blot

Abstract

Western blot é uma técnica de biologia molecular na qual detectamos proteínas específicas em amostra macerada de quaisquer tecidos biológicos. Essa técnica utiliza um sistema de eletroforese em gel utilizada para separar as proteínas pelo seu peso molecular. Consiste de duas etapas iniciais que são a corrida, que corresponde a separação das proteínas no gel, e a transferência das proteínas do gel para uma membrana, a qual pode ser de nitrocelulose ou polifluoreto de vinilideno (PVDF). A técnica de transferência pode ser realizada úmida ou semiseca, de acordo ao equipamento disponível no laboratório. As membranas são, então, bloqueadas, incubadas com anticorpos primários e, posteriormente, secundários para que sejam feitas lavagens e, por fim, a revelação. O anticorpo primário se liga a nossa proteína de interesse e o secundário se liga ao primário, sendo, portanto, uma técnica de quantificação de proteína qualificada como semiquantitativa ou indireta. Nesta última etapa, revelação, podemos saber qual a quantidade de uma proteína específica existente em cada grupo e comparálas. Existem vários métodos de detecção que podem ser utilizados, contudo a mais comumente usada é a quimioluminescência. A técnica de western blot é utilizada para detectar o anticorpo em algumas patologias, como no caso da síndrome de imunodeficiência adquirida. Quando utilizada na pesquisa científica, esta técnica pode ajudar a descobrir alvos moleculares específicos para que sejam desenvolvidas novas terapias para a condição ou patologia estudada.