Bioatividade dos extratos de alocasia macrorrhizos em cultura de células e modelo murino de vitiligo

Abstract

Na medicina tradicional do Vale do Mucuri, os extratos de tubérculos de Alocasia macrorrhizos são amplamente utilizados no tratamento do Vitiligo. Assim, torna-se importante considerar o valor potencial desta planta em seu conjunto, para a expansão do conhecimento sobre os princípios ativos para o uso seguro pela população. O objetivo deste estudo foi analisar a bioatividade dos extratos de A. macrorrhizos em cultura de células e modelo murino de vitiligo. Os tubérculos de A. macrorrhizos foram submetidos à extração aquosa, etanólica e de inibidores de proteases (IP). Os IP foram caracterizados utilizando SDS-PAGE, cromatografia líquida de alta efeciência (HPLC) e Espectrometria de Massas MALDI-ToF. Foi analisada a estequiometria de inibição de tripsina, atividade antioxidante e hemaglutinante dos IP. Para realização dos ensaios in vitro utilizou-se de células RAW 264.7 foram cultivadas, na presença e ausência de IP e de extrato aquoso. A viabilidade das células foi avaliada pelo método de MTT. O óxido nítrico (NO), pelo método de Griess, e o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), pelo método de ELISA, foram mensurados nos sobrenadantes da cultura. O modelo murino de vitiligo foi induzido com hidroquinona 5% em camundongos C57BL/6 machos, que foram tratados ou não com 100mg/kg de extrato de tubérculo torrado. Os resultados mostraram a presença de duas bandas com aproximadamente 11 e 24 kDa. A HPLC mostrou dois picos nos tempos de retenção de 12 e 13 minutos e a análise de Espectrometria de Massas detectou um íon mais intenso de m/z (4213.484) e (8435.185) no tubérculo cru. O valor médio de inibição da tripsina foi de 0,423mg/L no tubérculo cru. A porção crua mostrou 40% de atividade antioxidante sem apresentar atividade hemaglutinante. Apenas na concentração de 100 µg/ml no IP de tubérculo torrado houve redução expressiva da viabilidade das células RAW 264.7. Além disso, a maior concentração dos extratos aquosos e etanólicos apresentaram 50% de citotoxicidade. O IP do tubérculo cru obteve os melhores resultados de redução da produção de NO e TNF-α, assim como o extrato etanólico do tubérculo cru, sem apresentar citotoxicidade. Os dados obtidos das análises das amostras biológicas mostraram que ocorreu a repigmentação dos folículos pilosos e redução do espessamento da camada epidérmica observados a nível histopatológico. Conclui-se, portanto, que os resultados in vitro e in vivo sugerem uma possibilidade do uso de extratos da espécie vegetal Alocasia macrorrhizos para a terapêutica do vitiligo.