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Efeitos da restrição calórica desde o nascimento na cognição e comportamento ansioso e depressivo em ratos adultos
(UFVJM, 2022) Dias, Isabella Rocha; Cassilhas, Ricardo Cardoso; Sousa, Ricardo Augusto Leoni de; Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM); Cassilhas, Ricardo Cardoso; Santos, Carina de Sousa; Monteiro Junior, Renato Sobral
A restrição calórica (RC) vem sendo, desde os primeiros estudos publicados, a intervenção não farmacológica mais utilizada para investigar os mecanismos relacionados ao envelhecimento e longevidade. Essa intervenção tem mostrado resultados benéficos na redução e incidência de diversas doenças crônicas e declínios funcionais relacionadas ao envelhecimento como cânceres relacionados à idade, alterações imunológicas e neuroendócrinas, disfunções motoras e desenvolvimento de doenças como Parkinson e Alzheimer. Apesar de seus resultados benéficos em diversas condições, os efeitos da RC na cognição e comportamento apresentam resultados ambíguos, uma vez que seus efeitos variam de acordo com sua intensidade e período em que é realizada. O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos da restrição calórica de 50% desde o nascimento na cognição e comportamento de ratos Wistar machos adultos. Os animais foram distribuídos em grupo controle (C) (n=24) e grupo restrito (R) (n=24) e iniciaram o protocolo de RC a partir do nascimento, sendo amamentados em mães em regime de restrição para o grupo restrito. Após o desmame, os filhotes receberam a mesma dieta das mães até os 100 dias de idade. Aos 90 dias, os animais realizaram testes comportamentais para avaliar comportamento exploratório, aprendizagem e memória, memória espacial, comportamento ansioso e comportamento depressivo. Os dados foram analisados utilizando teste-t não pareado ou teste de Mann-Whitney, Anovas One-Way e Two-Way seguidas pelo post-hoc de Tukey, sendo estabelecido nível de significância para p<0,05. Os resultados do presente trabalho mostraram que a RC desde o nascimento não causou prejuízos cognitivos nos ratos quando em idade adulta, e ainda se mostrou benéfica para atenuar o comportamento semelhante à ansiedade. Em conjunto, esses dados podem contribuir para uma melhor compreensão dos mecanismos relacionados aos efeitos da RC no cérebro em modelos animais.
Os efeitos do treinamento de força sobre o comportamento ansioso, biomarcadores inflamatórios e morfologia do hipocampo em ratos submetidos à doses suprafisiológicas de esteroide anabólico androgênico
(UFVJM, 2022) Oliveira, Lucas Renan Sena de; Cassilhas, Ricardo Cardoso; Sousa, Ricardo Augusto Leoni de; Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM); Cassilhas, Ricardo Cardoso; Honorato Sampaio, Kinulpe; Machado, Frederico Sander Mansur
Introdução: Os esteroides anabólicos androgênicos (EAA) são derivados sintéticos do hormônio masculino testosterona que exercem efeitos androgênicos (masculinização) e anabólicos (construção muscular). Os EAA foram criados para o uso terapêutico em diversas condições fisiopatológicas. Entretanto, começaram a se popularizar tanto para fins de melhoria do desempenho atlético que abrange aumento da massa muscular, diminuição da gordura corporal e quanto para objetivos estéticos. Dentre os efeitos colaterais pode-se destacar hipogonadismo, complicações no sistema cardiovascular, problemas hepáticos e renais, além de diversas complicações psicológicas. Paralelamente aos efeitos prejudiciais causados pelos abusos em altas doses dos EAA, o exercício físico mostrou ser eficaz em melhorar processos fisiopatológicos, tanto físicos quanto mentais dos abusos dos EAA. Portanto, é necessário entender se o treinamento de força (TF), poderia se opor aos efeitos prejudiciais para a saúde causados pelo EAA decanoato de nandrolona (DECA). Objetivo: Investigar os benefícios protetores do TF no comportamento ansioso, biomarcadores inflamatórios musculares e morfologia de neurônios do hipocampo de ratos submetidos a doses suprafisiológicas de DECA. Materiais e Métodos: Os animais foram distribuídos em quatro grupos (N= 12 por grupo): A) SED/Salina; B) SED/DECA; C) Exe/Salina e D) Exe/DECA. O EAA DECA foi administrado em doses suprafisiológicas. A dose usada nos animais foi de 15 mg/kg ao dia, por 8 semanas (5 dias por semana). O TF foi realizado em escada adaptada concomitantemente com as aplicações da DECA e consistiu em 40 dias de treinamento (8 semanas). Após as 8 semanas de intervenção experimental, os animais foram submetidos a testes de carga máxima, avaliação da composição corporal, teste de campo aberto, seguida de pesagem dos tecidos, análise dos biomarcadores inflamatórios e morfologia dos neurônios do hipocampo. Resultados: O TF induziu incremento da carga de trabalho em ambos os grupos treinados, porém o grupo que tiveram a associação do DECA e TF esse incremento foi ainda maior. Vimos que o uso do DECA sozinho não levou incremento da força. Avaliamos a massa corporal total e observamos uma diminuição significativa em gramas dos dois grupos que utilizaram o DECA em relação ao grupo SED/Salina. Quando avaliamos a gordura corporal total, observamos diminuição significativa dos grupos Exe/Salina e Exe/DECA em comparação ao grupo SED/Salina. No percentual de gordura também encontramos diminuição dos grupos SED/DECA, Exe/Salina e Exe/DECA em comparação ao grupo SED/Salina. No teste de campo aberto, observamos aumento do comportamento ansioso no grupo SED/DECA em relação aos outros grupos experimentais, indicando que o TF evitou esse efeito ansiogênico. Avaliamos os níveis de biomarcadores inflamatórios no músculo sóleo e observamos aumento nos níveis de Il-10 do grupo Exe/Salina em comparação aos grupos SED/Salina, SED/DECA e Exe/DECA. Além disso, vimos um aumento nos níveis de TNF-α no grupo SED/DECA em relação aos grupos SED/Salina, Exe/Salina e Exe/DECA. Observamos aumento nos níveis de Il-6 do grupo Exe/salina em comparação ao grupo SED/DECA. Observamos aumento significativo da espessura da camada de neurônios granulares do DG do grupo Exe/Salina em comparação aos grupos SED/Salina e grupo Exe/DECA em comparação ao grupo SED/DECA. Conclusão: O uso do DECA em doses suprafisiológicas induziu diversos prejuízos à saúde, causando aumento do comportamento ansioso, alterações em biomarcadores inflamatórios e mudança na anatomia do hipocampo. Em paralelo aos efeitos prejudiciais do DECA, observamos que 8 semanas de TF protegeu os animais contra os efeitos deletérios desse EAA, levando à melhoria do comportamento ansioso, impedindo o aumento de biomarcadores inflamatórios e induzindo um aumento na espessura da camada celular dos neurônios do DG do hipocampo, além de promover aumento do músculo esquelético e da força muscular.
Manual técnico e de operação do Western Blot
(2021) Sousa, Ricardo Augusto Leoni de; Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri; Cassilhas, Ricardo Cardoso
Western blot é uma técnica de biologia molecular na qual detectamos proteínas específicas em amostra macerada de quaisquer tecidos biológicos. Essa técnica utiliza um sistema de eletroforese em gel utilizada para separar as proteínas pelo seu peso molecular. Consiste de duas etapas iniciais que são a corrida, que corresponde a separação das proteínas no gel, e a transferência das proteínas do gel para uma membrana, a qual pode ser de nitrocelulose ou polifluoreto de vinilideno (PVDF). A técnica de transferência pode ser realizada úmida ou semiseca, de acordo ao equipamento disponível no laboratório. As membranas são, então, bloqueadas, incubadas com anticorpos primários e, posteriormente, secundários para que sejam feitas lavagens e, por fim, a revelação. O anticorpo primário se liga a nossa proteína de interesse e o secundário se liga ao primário, sendo, portanto, uma técnica de quantificação de proteína qualificada como semiquantitativa ou indireta. Nesta última etapa, revelação, podemos saber qual a quantidade de uma proteína específica existente em cada grupo e comparálas. Existem vários métodos de detecção que podem ser utilizados, contudo a mais comumente usada é a quimioluminescência. A técnica de western blot é utilizada para detectar o anticorpo em algumas patologias, como no caso da síndrome de imunodeficiência adquirida. Quando utilizada na pesquisa científica, esta técnica pode ajudar a descobrir alvos moleculares específicos para que sejam desenvolvidas novas terapias para a condição ou patologia estudada.